超速离心：是囊泡分离的“金标准”，外泌体得率较高；但对实验仪器要求特殊，耗时较长，无法实现高通量。
提取试剂盒：基于外泌体表达的特异性表面抗原，利用相应的抗体通过免疫亲和分离，无须超速离心，耗时较短，可实现高通量；但相比超速离心，外泌体得率较低。
目前半岛分离外泌体采用的是 Qiagen ExoEasy kit。
这种情况其实还是没有成瘤。成瘤过程一般是细胞注射后有圆形小包，然后很快消失，再隆起(一般是组织液)，再变小变红(血管生成)，最后肿瘤快速生长。因此没有成瘤只是第二阶段，建议调整一下细胞注射量、更换实验鼠或添加一些促进细胞生长的因子试试。
有必要，至少需要两次生物学重复，3次以上的生物学重复更好。2011年7月Hansen发表的文章表明生物学差异是基因自身表达的特性，与检测技术的选择以及数据处理的方式无关。如果不设生物学重复，高影响因子的杂志可能会因此而拒稿。
四个要点需要注意：一是要快，尽快洗净或处理，处理后快速冷冻。细胞可以直接用Trizol裂解后冷冻，组织洗净后，分成小块直接冷冻；二是低温，先浸入液氮，数小时后再放入-70或-80度超低温冰箱缓冻为佳。超低温冰箱可以保存数月至一年以上，-20度不宜久存；三是避免温度波动，一台经常开关门，温度上下波动的-80度冰箱，可能冷冻效果还不如一天稳定在-40度的冰箱；四是推荐进口冻存管，标签冷冻后容易破碎，不妨自己用记号笔进行标记。
组内差异大主要表现是组内老鼠有的长不出肿瘤组织，有的缺长得很大。原因很多，其一可能是接种悬液没有摇匀，这种可能性较小；其二是可能存在一定的个体差异，鼠龄是一个很大的影响因素，建议控制好实验条件，动物周龄控制在5-6周左右，体重均一，健康状态一致。
优先建议做3次实验重复，符合一般的文章对实验数据的要求，不建议使用两重复或只做一次，可能引起审稿人和编辑的质疑。
技术重复一般和上机重复非常类似，即上质谱的重复，即测试仪器的稳定性，判断系统误差等问题。而应用型的文章中，上机重复或技术重复一般没有硬性规定，可以不做，如果做了当然最好，Editor就不会再此处找你的问题。
公司总部地址：北京市北京经济开发区经海三路天骥智谷60号楼207室
实验研发基地：天津市武清区武清开发区创业总部基地B座
联系电话： 01067860414
邮箱地址：genecomeservice@163.com
Copyright@2020 北京半岛科技有限公司 京ICP备20021745号-1
